О иммунологии

Способ является сложным в техническом отно­шении, и процесс введения часто сопровождается смертью животного.

7) Введение в подушечки лап; нет никаких дока­зательств, что этот способ имеет какие-либо преимущества пе­ред подкожным или внутрикожным введением. В то же время такой способ введения может вызвать у животных ощущение дискомфорта из-за болезненного распухания лап, в связи с чем его лучше не использовать.

Последовательность инъекций и сбора антисыворотки

В связи со значительными различиями между животными и с отсутствием специальной информации интервалы введения иммуногена приходится выбирать эмпирическим путем. В табл. 4.1 в качестве примера приведен протокол введения, проверенный на практике. Однако вполне возможно, что бо­лее короткие или более продолжительные интервалы были бы не менее, а возможно, даже и более эффективными. Для выяснения этого вопроса требуется, однако, больше работы, чем затрачивается обычно на все налаживание системы для радиоиммунологического анализа, а полученные результаты ч могут быть использованы только применительно к данному конкретному иммуногену.


Несколько яснее вопрос о том, когда лучше всего собирать антисыворотку; на рис. 4.5 показан типичный ответ на под­держивающие (т. е. повторные) инъекции. Имеются некоторые указания на то, что титр антител, достигнув пика, снижается. Опыт показывает, однако, что при этом возможны большие вариации: у некоторых животных титр сохраняется в течение .месяцев и даже лет и после прекращения поддерживающих инъекций, тогда как у других животных он постепенно па­дает.

Отбор антисывороток для использования в радиоиммунологическом методе анализа

Иммунизация по описанной выше схеме будет давать ряд антисывороток, из которых следует отобрать одну или не­сколько для использования в радиоиммунологическом методе анализа. Критериями при таком отборе являются специфич­ность, сродство и титр.

Специфичность. Специфичность является основным крите­рием, и если антисыворотка не обладает необходимой специ­фичностью, она не представляет никакой ценности для ана­лиза независимо от ее сродства и титра.

Сродство. Чувствительность метода анализа тесно связана со сродством или величиной К антител (разд. 1.7—1.10); как правило, для использования в анализе отбирают антисыво­ротку с максимальной величиной К, определяемой по графику Скэтчарда. Это правило применимо даже к тем методам ана­лиза, при которых не требуется максимальной чувствительно­сти (разд. 8.3), поскольку большая величина К позволяет ожидать (хотя и не гарантирует) быстрого установления рав­новесия. Гетерогенность кажущихся значений К, обусловли­вающая тот факт, что график Скэтчарда представляет собой кривую линию вместо прямой, также является важным фак­тором, так как она может вызывать уменьшение наклона ка­либровочной кривой (рис. 4.6).


Титр. При наличии антисывороток, обладающих одинако­вой специфичностью и одинаковым сродством, конечный вы­бор может зависеть от их титра (выражаемого величиной, об­ратной разведению, при котором связывается 50% меченого лиганда). Так, например, антисыворотку с титром 1:50 000 предпочитают антисыворотке с титром 1:20 000, так как в первом случае с помощью 1 мл исходной сыворотки можно провести значительно большее число анализов. Следует под­черкнуть, что титр не является прямым отражением сродства, поскольку он зависит также от общей концентрации антитела. Две разные антисыворотки дают одинаковые кривые разведе­ния, если одна из них имеет в 10 раз меньшую величину К, но при этом содержит в 10 раз больше антител, чем другая.

Хранение антисывороток

Сыворотку обычно предпочитают плазме, поскольку в этом случае меньше вероятность образования криопреципитатов. Рекомендуется хранить сыворотку при —20 градусов С, предваритель­но разделив ее на аликвоты, чтобы свести к минимуму воз­можность повреждающего действия повторного заморажива­ния и размораживания. Размер каждой порции должен зави­сеть от общего объема и от того, с какой скоростью исполь­зуется антисыворотка. Размороженную порцию хранят, как правило, при 2—4 градуса С с добавкой такого консерванта, как азид натрия (0,1%); при этих условиях антисыворотка остается стабильной в течение 3—6 мес.

Функциональные характеристики компонентов иммунной системы человека

состояние иммунной системы особи - это количественные и определяющие функционирование параметры отдельных элементов защитной системы на данном отрезке формирования особи или на определенной ступени протекания расстройства. Функция совокупности защитных сил организма строго устроена, сопряжена и увязана с работой иных построений, она имеет свою cпецифику и точна, наряду с этим всеобъемлюща и весьма многолика по тем или иным проявлениям.

Действуют общие законы деятельности защитной системы:

а) успех функционирования защитной системы предопределяется большинством ее составляющих;

б) степень тонуса иммунной системы тесно связана с степенью связанности cоответствующих составляющих.

Недостаток тех или иных составляющих а также элементов иммунитета исходного (унаследованного) или вторичного (полученного) типа нередко восполняется иными элементами иммунной системы. Так, естественная пангипогамма-глобулинемия только у тридцати процентов больных приобретает клинически выявленное течение. Нередко какой-либо дефект составных частей иммунитета является только фактором риска, а не равноценен недомоганию. Отсюда очевидно, что далеко не у всех индивидуумов с патологией компонентов иммунной системы она определяется.

Любая болезнь проводит к сильному повышению взаимосвязанности звеньев иммунной системы, а оздоровление - к нормализации. При хронических расстройствах, иначе, ослабление проявлений болезни ведет к избытку в несколько раз связанности иммунных компонентов, а ухудшение - к существенному понижению. Видно, обострение недуга определяет нарушение результативной деятельности защитных сил организма.


назад далее