информационный портал о клинической иммунологиии
Однако повышение температуры не дает обычно увеличения чувствительности, и в то же время оно может повышать скорость таких нежелательных реакций, как, например, энзиматическое разрушение меченого лиганда. Допустимый верхний предел температуры 45 градусов С.
Основное исключение из этого общего правила составляет группа методов, в которых в качестве связывающих агентов используются связывающие белки крови. Константа сродства этих белков заметно повышается при понижении температур, и соответственно (как и следовало ожидать) повышается чувствительность анализа. Аналогичное явление может наблюдаться при иммунологическом анализе пептидов, в связи с чем в тех случаях, когда требуется исключительно высокая чувствительность, следует проверять возможность использования низких температур (Keane et al., 1976).
Метод анализа, который действительно зависит от температуры, может вызывать ряд серьезных технических трудностей. Содержание большого числа пробирок при фиксированной и одинаковой температуре представляет определенную сложность; так, например, если плотно заполненный пробирками штатив извлекают из холодной комнаты или из холодильника и оставляют на лабораторном столе, то сравнительно быстро может установиться значительная разница температур (более 5 градусов С) между пробирками, находящимися с краю и в центре штатива. Это обстоятельство может иметь значение и в тех методах анализа, в которых в качестве меченого лиганда используется меченый фермент. Радиоактивность же, как известно, не зависит от температуры.
Увеличение числа параллельных проб
Как уже подчеркивалось выше, чувствительность анализа очень сильно зависит от точности. В свою очередь доверительный интервал для каждой величины зависит от числа параллельных определений: с увеличением этого числа доверительный интервал будет сужаться, а чувствительность метода анализа будет повышаться. Хотя практически такой подход используется редко (поскольку он требует лишней работы), тем не менее, из всех обсуждавшихся до сих пор способов это единственный способ, который при заданных условиях и при заданном наборе реагентов может давать почти неограниченное повышение чувствительности.
Экстракция и концентрирование
Пути повышения чувствительности с помощью экстракции и концентрирования уже обсуждались.
Основные функции нулевых клеток
НК- клетки (0-клетки, ни В-, ни тимус-зависимые лимфоциты) насчитывают 6-11 % клеточных элементов циркулирующей крови. Их число увеличивается при некоторых болезнях (например, при ревматическом артрите). Среди 0-клеток по функциональным параметрам определяют врождённые киллеры (NK-клетки), действующие вещества ADCC (К-клетки). К тому же к гетерогенной группе лимфоцитов причисляются мононуклеарные клетки крови с низкой рабочей активностью, несформировавшиеся или изнашивающиеся, дефектные, скажем, временно утратившие рецепторные окончания клетки или тимус-зависимые и развивающиеся вне тимуса мононуклеарные клетки крови с расстроенными рецепторами. Поскольку в сосудистом кровотоке количество развивающихся в эмбриональном тимусе особых белых кровяных клеток, участвующих в работе иммунной системы значительно перекрывает уровень В- лимфоцитов, то число группы лимфоцитов, не обладающих способностью формирования Е-розетки и не несущих поверхностного иммуноглобулина определяется Т- особыми белыми кровяными клетками, участвующими в работе иммунной системы
Увеличение количества гетерогенной группы лимфоцитов нередко вызвано интенсивным выходом из кровотока в центр воспаления и lymphoid tissue развивающихся в эмбриональном тимусе и В- особых белых кровяных клеток, участвующих в работе иммунной системы, поскольку в очаг воспаления уходят особенно действенно динамичные мононуклеарные клетки крови, а менее активные сохраняются в крови, что и прибавляет их удельный вес. Затем, прибытие в кровоток в больших величинах инородного вещества и ядовитых веществ затормаживает функциональный тонус мононуклеарных клеток крови, поэтому в кровотока увеличивается численность 0-клеток. Зачастую это отмечается при тяжких инфекционных заболеваниях, протекающих с сильной интоксикацией.
Прирастает численность группы лимфоцитов, не обладающих способностью формирования Е-розетки и не несущих поверхностного иммуноглобулина при интенсивном выходе из ткани, заполняющей полость костей юных форм тимус-зависимых и В- мононуклеарных клеток крови, значительная доля которых с не особо большим уровнем окончаний. Подобное состояние отмечается при заражении крови, воспалении брюшной полости и иных тяжелых выматывающих расстройствах.
Повышение количества нулевых клеток обычно является подтверждением снижения численности тимус-зависимых лимфоцитов. При лимфопролиферативных расстройствах нарастание числа группы лимфоцитов, не обладающих способностью формирования Е-розетки и не несущих поверхностного иммуноглобулина - негативный показатель утяжеления процесса.
Среди группы лимфоцитов, не обладающих способностью формирования Е-розетки и не несущих поверхностного иммуноглобулина К-клетки и врождённые киллеры осуществляют основную работу совокупности защитных сил организма- сохранение способности противостоять изменениям и сохранять относительную динамическую устойчивость организма путем устранения любых основной структурно функциональной единицы организма, доставляющих генетическую инородность: клетки, измененные в результате мутации (главным образом клетки, подверженные неконтролируемому метастазированию), клетки, зараженные возбудителями заболевания, или основные структурно функциональные единицы организма трансплантата.